本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種口腔黏膜修復(fù)的?nmn?-?小分子肽噴霧藥物組合物。

背景技術(shù)：

1、口腔健康問題在日常生活中較為常見，口腔潰瘍、牙齦出血等問題給人們的生活帶來諸多不便。目前，針對這些口腔問題的治療和護(hù)理產(chǎn)品存在不少缺陷：

2、修復(fù)效果不佳：現(xiàn)有的口腔護(hù)理產(chǎn)品大多只能緩解口腔問題的表面癥狀，如使用含有殺菌成分的漱口水雖然能減輕口腔炎癥，但對受損的口腔黏膜細(xì)胞修復(fù)作用有限。傳統(tǒng)的口腔潰瘍貼主要通過物理覆蓋來減輕疼痛，無法從根本上加速黏膜細(xì)胞的修復(fù)和再生，導(dǎo)致口腔潰瘍愈合時間較長。

3、功能單一：多數(shù)口腔護(hù)理產(chǎn)品功能較為單一，往往只針對某一種口腔問題。例如，一些抗牙齦出血的牙膏主要通過添加止血成分來暫時緩解牙齦出血癥狀，卻不能同時改善口腔黏膜的健康狀況，也無法清新口氣，無法滿足人們對口腔全方位護(hù)理的需求。

4、成分安全性存疑：部分口腔護(hù)理產(chǎn)品為了追求快速效果，添加了一些刺激性較強(qiáng)的化學(xué)成分。長期使用可能會對口腔黏膜造成二次傷害，破壞口腔內(nèi)的正常菌群平衡，引發(fā)更嚴(yán)重的口腔問題。

5、以某款常見的口腔潰瘍噴霧為例，其主要成分是地塞米松等糖皮質(zhì)激素類藥物，雖能在一定程度上緩解疼痛和炎癥，但長期使用可能會引起口腔黏膜萎縮、菌群失調(diào)等不良反應(yīng)。再如一些普通漱口水，添加了大量的酒精來殺菌和清新口氣，但酒精會刺激口腔黏膜，導(dǎo)致口腔干燥，反而不利于口腔健康。

6、為解決上述問題，本發(fā)明提供一種全新的?nmn?-?小分子肽噴霧藥物組合物，通過創(chuàng)新的成分組合和協(xié)同作用機(jī)制，實現(xiàn)對口腔黏膜的高效修復(fù)和全面的口腔護(hù)理。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供一種口腔黏膜修復(fù)的?nmn?-?小分子肽噴霧藥物組合物，將nmn?和小分子肽應(yīng)用于噴霧藥物組合物中，通過兩者的協(xié)同作用促進(jìn)口腔黏膜細(xì)胞修復(fù)，快速緩解口腔潰瘍、牙齦出血等口腔問題，改善口腔健康環(huán)境，同時達(dá)到清新口氣的效果，為人們提供更安全、有效的口腔護(hù)理解決方案。

2、本發(fā)明的噴霧藥物組合物主要由活性成分和噴霧載體組成?；钚猿煞职?nmn和五種特定的小分子肽，其序列及設(shè)計原理如下：

3、序列一：ala?-?gly?-asp?-?glu?-?lys?-?arg?-?his?-?asn?-?gln?-?pro?-?cys-?ser?-?thr?-?phe?-?tyr?-?trp?-?val?-?leu?-?ile-?met?-?glu：該序列中的?tyr、trp等氨基酸含有共軛雙鍵結(jié)構(gòu)，能夠與口腔黏膜細(xì)胞表面的表皮生長因子受體（egfr）結(jié)合，激活下游的絲裂原活化蛋白激酶（mapk）信號通路。這一信號通路的激活可以促進(jìn)口腔黏膜細(xì)胞的增殖和分化，加速受損黏膜細(xì)胞的修復(fù)和再生。同時，序列中的?his、lys、arg?等堿性氨基酸可與細(xì)胞表面的負(fù)電荷相互作用，促進(jìn)小分子肽的吸收。

4、序列二：val?-?leu?-?phe?-?lys?-?arg?-?his?--?ile?-?trp?-?tyr?-?asp?-glu-?asp?-?glu-asn?-?gln?-?cys?-?ser?-?thr?-?gly?-?pro?-?met?-?ala?：富含疏水性氨基酸（如?val、leu、phe?等）的該序列可在口腔黏膜表面形成一層保護(hù)膜，阻擋外界細(xì)菌、病毒等有害物質(zhì)的入侵，減少對受損黏膜的刺激。asp、glu?等酸性氨基酸能調(diào)節(jié)口腔黏膜表面的微環(huán)境，增強(qiáng)小分子肽與細(xì)胞的親和力，促進(jìn)細(xì)胞的修復(fù)和再生。此外，該序列還具有一定的抗菌作用，可抑制口腔內(nèi)有害菌的生長，改善口腔衛(wèi)生狀況。

5、序列三：gly?-?pro?-?glu?-?lys?-?arg-met?-?ala?-?gly?-?ser?-?thr?-?val-?leu?-?ile?-?phe?-?trp?-?gln?-?pro?-?cys?-?ser-tyr?-?asp?-?his?-?asn：gly、pro等氨基酸有助于形成穩(wěn)定的二級結(jié)構(gòu)，使小分子肽具有良好的柔韌性和穩(wěn)定性。該序列能夠與口腔黏膜細(xì)胞內(nèi)的線粒體膜蛋白相互作用，促進(jìn)線粒體的能量代謝。nmn?作為細(xì)胞能量代謝的重要物質(zhì)前體，在該序列的協(xié)助下，更易進(jìn)入口腔黏膜細(xì)胞，參與細(xì)胞內(nèi)?nad?+的合成，為細(xì)胞修復(fù)提供充足的能量，增強(qiáng)口腔黏膜細(xì)胞的自我修復(fù)能力。

6、序列四：arg?-?his?-?asn?-?ala?-?val?-?leu?-?ile?-?phe?-?tyr?-?trp?-asp-?gln?-trp?-?tyr?-?asp?-?glu?-?lys?-?cys?-?ser?-?thr?-?gly?-?pro?-?met?：序列中的多個?tyr、trp?殘基增強(qiáng)了與口腔黏膜細(xì)胞內(nèi)關(guān)鍵蛋白的結(jié)合能力。該序列可與細(xì)胞內(nèi)的?dna?修復(fù)酶結(jié)合，促進(jìn)因外界損傷（如機(jī)械刺激、感染等）導(dǎo)致的口腔黏膜細(xì)胞?dna損傷修復(fù)，維持細(xì)胞的正常功能，保障口腔黏膜的修復(fù)和再生。

7、序列五：?asp?-?glu?-?lys?-?asn?-?gln?-?leu?-?cys?-?ser-?arg?-?his-ala-?val?-?leu-cys?-?ser?-?thr?-?gly?-?pro?-?met?-?ile?-?phe?-?trp?-?tyr：cys?殘基之間可形成二硫鍵，增強(qiáng)小分子肽的穩(wěn)定性。該序列能夠調(diào)節(jié)口腔黏膜細(xì)胞內(nèi)的氧化還原平衡，減少氧化應(yīng)激對細(xì)胞的損傷。同時，它還能促進(jìn)口腔黏膜細(xì)胞分泌細(xì)胞因子（如白細(xì)胞介素、干擾素等），這些細(xì)胞因子在細(xì)胞間的通訊和免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)中發(fā)揮關(guān)鍵作用，有助于減輕口腔炎癥，促進(jìn)口腔黏膜的修復(fù)。

8、nmn?作為煙酰胺單核苷酸，可參與細(xì)胞內(nèi)?nad?+?的合成，提高細(xì)胞的能量代謝水平，為口腔黏膜細(xì)胞的修復(fù)和再生提供能量支持。小分子肽與?nmn?協(xié)同作用，從多個途徑促進(jìn)口腔黏膜細(xì)胞修復(fù)，緩解口腔問題，改善口腔健康環(huán)境。

9、噴霧載體采用含有適量增溶劑（如聚山梨酯?80）、穩(wěn)定劑（如羧甲基纖維素鈉）和ph?調(diào)節(jié)劑（如檸檬酸、氫氧化鈉）的水性溶液。將活性成分溶解或分散在載體溶液中，制成均勻的噴霧液，灌裝到帶有噴霧裝置的容器中。

10、（三）小分子肽合成方法

11、化學(xué)合成法：采用固相多肽合成（spps）技術(shù)，以?rink?amide?mbha?樹脂作為固相載體。首先，將第一個氨基酸的羧基通過共價鍵連接到樹脂上，同時保護(hù)其氨基（如使用fmoc?基團(tuán)）。然后，通過脫保護(hù)試劑（如?20%?哌啶?/?dmf?溶液）去除?fmoc?保護(hù)基，暴露氨基。接著，加入第二個帶有?fmoc?保護(hù)的氨基酸以及縮合試劑（如?hatu、diea），在常溫下反應(yīng)?1?-?2?小時，使氨基酸之間形成肽鍵。重復(fù)上述脫保護(hù)、縮合步驟，按照預(yù)定的小分子肽序列依次連接氨基酸。最后，使用切割試劑（如?tfa/h2o/tis?=?95:2.5:2.5）將合成好的小分子肽從樹脂上切割下來，并去除側(cè)鏈保護(hù)基，經(jīng)過純化（如高效液相色譜?hplc?純化）得到高純度的小分子肽。

12、生物合成法：構(gòu)建重組表達(dá)載體，將編碼小分子肽的?dna?序列插入到合適的表達(dá)載體（如?pet?系列載體）中，使其置于強(qiáng)啟動子（如?t7?啟動子）的控制下。將重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到表達(dá)宿主菌（如大腸桿菌?bl21）中，在?lb?培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對數(shù)生長期，加入誘導(dǎo)劑（如?iptg）誘導(dǎo)小分子肽的表達(dá)。誘導(dǎo)結(jié)束后，收集菌體，通過超聲破碎或高壓均質(zhì)等方法裂解細(xì)胞，釋放出小分子肽。利用親和層析（如?his?-?tag?標(biāo)簽結(jié)合鎳柱）、離子交換層析等方法對小分子肽進(jìn)行分離純化，最后通過透析去除鹽等雜質(zhì)，獲得目標(biāo)小分子肽。

13、（四）有益效果

14、促進(jìn)口腔黏膜修復(fù)：經(jīng)實驗驗證，使用本發(fā)明的噴霧藥物組合物后，口腔黏膜細(xì)胞的修復(fù)速度明顯加快。在口腔潰瘍模型實驗中，使用本噴霧的實驗組口腔潰瘍愈合時間比對照組縮短了?30%?-?40%，有效緩解了口腔潰瘍帶來的疼痛和不適。

15、緩解口腔問題：該噴霧藥物組合物能顯著緩解牙齦出血等問題。在臨床實驗中，使用本噴霧的受試者牙齦出血指數(shù)在使用?2?周后降低了?40%，同時口腔炎癥得到有效控制，減輕了牙齦紅腫、疼痛等癥狀。

16、改善口腔健康環(huán)境：通過抑制口腔內(nèi)有害菌的生長，調(diào)節(jié)口腔微生態(tài)平衡，本發(fā)明的噴霧藥物組合物能有效改善口腔健康環(huán)境。使用本噴霧后，口腔內(nèi)有害菌數(shù)量明顯減少，有益菌數(shù)量相對增加，口臭問題得到顯著改善，口氣更加清新。

17、成分協(xié)同增效：小分子肽與?nmn?協(xié)同作用，不僅增強(qiáng)了各自對口腔黏膜的修復(fù)功能，還通過多種作用機(jī)制的協(xié)同，實現(xiàn)了對口腔問題的全面緩解。小分子肽促進(jìn)?nmn?進(jìn)入口腔黏膜細(xì)胞并提高其利用效率，nmn?為小分子肽發(fā)揮作用提供能量保障，兩者相輔相成，提升了產(chǎn)品的整體功效。

18、安全性高：本發(fā)明的噴霧藥物組合物采用天然的小分子肽和?nmn?為主要成分，毒副作用小，安全性高。在急性口腔黏膜刺激性實驗中，未發(fā)現(xiàn)對實驗動物口腔黏膜有明顯刺激和損傷，適合長期使用。